检测目的基因是否导入受体细胞的方法有哪几种
1、可以用抗体-抗原的方法检测。除了这些分子层次的检测,还要进行一些实验检测。基因表达载体就是目的基因和合适的运载体的结合成重组DNA。一般包括目的基因,启动子,终止子,标记基因。运载体有很多种,质粒是其中最常用的一种。以质粒做运载体和目的基因结合就叫质粒表达载体。
2、检测分三种,首先是通过对标记基因的检测,通常用DNA分子杂交技术,来检验标记基因(目的基因)是否成功的导入受体细胞。再用DNA分子杂交技术,来看目的基因导入后是否成功转录出信使RNA。最后可以用抗原-抗体检验,来验证导入基因是否成功表达。用标记基因检测与鉴定 只是一个简写。
3、目的基因导入受细胞后,是否可以稳定维持和表达其遗传特性,只通过检测与鉴定才能知道。在检测与鉴定时我认为有以下五种检测鉴定:检测受体细胞中的标记基因是否表达,即是否表现出标记基因的性状,从而判断受体细胞中是否已导入含有目的基因的运载体。
4、近年来研究者常采用PCR-Southern杂交技术,即先对被检测的材料进行PCR扩增,然后再用目的基因的同源探针与扩增产物进行杂交。再采用RT-PCR检测转录产物,即以受体总RNA或mRNA为模板进行逆转录合,然后再进行PCR扩增,如果得到特异的cDNA扩增条带,则表明目的基因实现了转录。
5、标记基因的作用在于便于检测目的基因的情况。因为标记基因和目的基因同位于运载体上,要导入都导入,要表达则都会表达。检测分三种,首先是通过对标记基因的检测,通常用DNA分子杂交技术,来检验标记基因是否成功的导入受体细胞。或者用分子杂交技术,来看目的基因导入后是否成功转录出信使RNA。
6、在原核克隆过程中:最常用的是抗性筛选:载体上具有某种或某几种抗生素抗性基因,转化之后涂布在含有该抗生素的平板上,能长的就是载体进入了的细胞。挑选之后可以再利用菌落PCR或者扩增之后酶切,以鉴定目的基因是否也重组进去了,以排除载体自连的空载。最后用测序的方法检测是否有突变产生。
如何检测目的基因是否进入受体细胞
用该抗生素在受体上做一个杀伤曲线,根据这个曲线选择合适的抗生素浓度,在培养受体时加压筛选,能够留下来的受体都是已经成功导入了目的基因的。
用DNA分子杂交技术,如果能形成杂合的双链,则受体细胞含有目的基因,否则,目的基因没有进入受体细胞。
目的基因整合到受体细胞染色体DNA上,那么目的基因肯定也进入了受体细胞啊。检测目的基因是否进入到受体细胞,一般要进行3个层次上的检测:1目的基因是否整合到受体细胞染色体DNA上,2目的基因是否转录出MRNA,3目的基因是否翻译出蛋白质。1和2都可以用DNA分子杂交技术检测,3可以用抗体-抗原的方法检测。
检测目的基因是否导入受体细胞和目的基因是否在受体细胞中的标志有何...
目的基因整合到受体细胞染色体DNA上,那么目的基因肯定也进入了受体细胞啊。检测目的基因是否进入到受体细胞,一般要进行3个层次上的检测:1目的基因是否整合到受体细胞染色体DNA上,2目的基因是否转录出MRNA,3目的基因是否翻译出蛋白质。1和2都可以用DNA分子杂交技术检测,3可以用抗体-抗原的方法检测。
标记基因的作用在于便于检测目的基因的情况。因为标记基因和目的基因同位于运载体上,要导入都导入,要表达则都会表达。检测分三种,首先是通过对标记基因的检测,通常用DNA分子杂交技术,来检验标记基因是否成功的导入受体细胞。或者用分子杂交技术,来看目的基因导入后是否成功转录出信使RNA。
一种是:目的基因导入了受体细胞但却没表达。(目的基因不是只要导入受体细胞就能表达的,它本身的表达要受到一些修饰部位影响)。第二种是:目的基因根本没有导入受体细胞。 抗性基因一般是位于运载体上,它属于标记基因。
如果目的基因成功导入质粒,就破坏了标记基因的结构,那么导入重组质粒的受体细胞就不会表现出抗性;如果目的基因没有成功导入质粒,则受体细胞表现出抗性。这就是标记基因的作用。
鉴定目的基因是否导入受体细胞一般采用什么方法
1、检测目的基因是否导入受体细胞的方法有以下两种:农杆菌转化法(植物常用)农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌,它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物和裸子植物的受伤部位(受伤处的细胞会分泌大量酚类化合物,从而使农杆菌移向这些细胞),并诱导产生冠瘿瘤或发状根。
2、目的基因片段后偶联一个抗生素的抗性基因片段,将他们作为一个整体的目的基因片段导入受体。用该抗生素在受体上做一个杀伤曲线,根据这个曲线选择合适的抗生素浓度,在培养受体时加压筛选,能够留下来的受体都是已经成功导入了目的基因的。
3、检测目的基因是否导入受体细胞,用到的是DNA的分子杂交技术。标记基因是用于筛选的。比如是导入的重组质粒中有青霉素抗性基因,那个没有导入重组质粒的细菌不能再含有青霉素的培养基上存活,这样剩下的都是导入重组质粒的细菌。
4、检测目的基因是否导入受体细胞用DNA分子杂交技术,检测目的基因是否转录用分子杂交技术,检测目的基因是否翻译合成蛋白质用抗原抗体杂交技术。题中最后一个空检测是否表达,基因表达是要控制合成蛋白质的,所以用抗原抗体杂交技术。
用标记基因怎样怎么鉴定目的基因的导入?
1、标记基因只是检测目的基因是否导入了受体细胞。
2、一种是:目的基因导入了受体细胞但却没表达。(目的基因不是只要导入受体细胞就能表达的,它本身的表达要受到一些修饰部位影响)。第二种是:目的基因根本没有导入受体细胞。 抗性基因一般是位于运载体上,它属于标记基因。
3、如果目的基因能够成功插入位点,那么经过链接酶的作用,线性的骨架质粒和你的目的基因又能够成功变成一个环状质粒。环状质粒上的基因能够得到表达,所以能产生对某种抗生素的抗性,而线性的质粒不能。
4、检测分三种,首先是通过对标记基因的检测,通常用DNA分子杂交技术,来检验标记基因(目的基因)是否成功的导入受体细胞。再用DNA分子杂交技术,来看目的基因导入后是否成功转录出信使RNA。最后可以用抗原-抗体检验,来验证导入基因是否成功表达。用标记基因检测与鉴定 只是一个简写。
5、目的基因是要有特殊的标记基因的,导入受体细胞才能检验目的基因是否导入成功,如某段目的基因的抗青霉素的特性就可以用青霉素来检验。
6、基因工程中标记基因必不可少,基因工程的核心步骤,构建基因表达载体,中用标记基因检测重组质粒是否已经导入受体细胞中,从而区分己导入细胞和未导入细胞。(标记基因通常是抗生素基因。
检测受体细胞中是否导入了目的基因,到底是分子杂交,还是用标记基因...
检测目的基因是否导入受体细胞,用到的是DNA的分子杂交技术。标记基因是用于筛选的。比如是导入的重组质粒中有青霉素抗性基因,那个没有导入重组质粒的细菌不能再含有青霉素的培养基上存活,这样剩下的都是导入重组质粒的细菌。
检测分三种,首先是通过对标记基因的检测,通常用DNA分子杂交技术,来检验标记基因(目的基因)是否成功的导入受体细胞。再用DNA分子杂交技术,来看目的基因导入后是否成功转录出信使RNA。最后可以用抗原-抗体检验,来验证导入基因是否成功表达。用标记基因检测与鉴定 只是一个简写。
分子杂交技术。但是,可以用同位素标记的核酸探针与染色体dna杂交,将通过检测同位素的放射性,判断探针是否与染色体结合,结合则是插入目的基因。这也用到同位素标记了,但现在也有用荧光物质标记的探针,所以在两种技术选一的情况下,是分子杂交技术。真纠结啊,那就信书吧。
标记基因只是检测目的基因是否导入了受体细胞。但导入的目的基因是否能整合到受体细胞的基因组中以及是不是能正常表达,还要用到分子杂交的方法。
标记基因是检查目的基因是否整合到表达载体上。分子杂交是检查目的基因是否导入受体细胞。